Lycium barbarum увеличивает калорийность расходы и уменьшает окружность талии у здоровых полных мужчин и женщин: пилотное исследование

Подтверждение Нэш индуцированная 8-недельного максимума-жировой рацион кормления

Чтобы убедиться в успешном создании Нэш очагов в печени крыс, биопсия печени с высоким содержанием жиров кормили крыс была совершена в конце 8^ой неделю, до начала “терапевтического” администрация LBP. Показано, что высокое содержание жира диетой очевидно, печеночной гистопатологические изменения в печени, жирового накопления, очаги воспалительных клеток и некроз (Доп.. рисунки 1А и 1Б). NAS оценка печени с высоким содержанием жиров кормили крыс была значительно выше, чем у обычных крыс, получавших с регулярной животных чау кормить (Доп. рис. 1С).

LBP процедуры мелиорированных крысы ожирение и инсулинорезистентность

Восемь недель, высокое потребление жиров и вызывала достоверное увеличение массы тела крыс, когда по сравнению с крысами контрольной группы, которую кормили обычной крысы диета (365.0 ± 9,8 г, против 326.3 ± 11,6 г в 8 недель, p < 0.05). Администрация 1 мг/кг LBP значительно снижается масса тела Нэш крыс из 3^rd недели до 12^ой неделю (340.2 ± 13.4 г [LBP-лечение] против 401.7 ± 10,7 г [NASH-лечение] в 12^ой неделю, p < 0.05). Для терапевтического лечения LBP, которая началась с 9^ой 12^ой неделю, также значительно уменьшается вес тела с высоким содержанием жиров кормили крыс (352.1 ± 14,0 г [LBP-лечение] против 401.7 ± 10,7 г [NASH-лечение] в 12^ой неделю, p < 0.05) (Рис. 1A). Администрация LBP в обоих LBP-группах, получавших (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12week) не влияют на вес тела, когда по сравнению с крысами контрольной группы (данные не показаны). Результаты мокрого веса печени также подтвердили против ожирения эффект LBP. Влажный вес печени NASH крыс была значительно выше, чем у контрольных крыс (13.4 ± 0,1 г по сравнению с 11,5 ± 0,3 г, p < 0.05). Оба LBP-группах, получавших снизили вес печени NASH крыс сравнимого уровня контроля (Рисунок 1Б). Интересно, что для большинства недель, администрация LBP не влияют на аппетит Нэш крыс. Не было никакого существенного различия в дневной прием пищи объем между LBP-лечение Нэш крыс и Нэш крыс без LBP кроме недель с 3, 4 и 11 (Рис. 1С).

В нашом крыс, инъекции рекомбинантного инсулина обусловлено нарушениями обмен инсулина/оформления, когда по сравнению с контролем и автомобиля-LBP крыс (Доп. рис. 2B). Процедуры с LBP существенно повысили клиренс инсулина обесценение индуцированных Нэш (Доп. рис. 2B). Кроме того, из результатов уровня глюкозы в крови и AUC районах, LBP процедуры эффективного повышения резистентности к инсулину (Рис. 1E и 1F). Аналогично, после нормализации с базального уровня глюкозы в крови, мы обнаружили, что dysregulated метаболизм глюкозы в нашом крыс было также очевидно, что исправлено LBP администрации в обеих группах, получавших (Рис. 1G и 1H, Доп. рисунок 2а). Для дальнейшего исследования путей, вовлеченных в улучшении инсулина и метаболизм глюкозы, мы измерили изменение резистина и IRS-1/GSK3α путей во всех группах. Было обнаружено, что высокое содержание жира в диете значительно возросло белка уровнем резистина и фосфорилирования уровень GSK3α. Он также снизилась фосфорилирование IRS-1. LBP администрации, либо совместного лечения или задержки-лечение, counter-действовал влияние высокожировой диете, на эти пути, не влияя на общий уровень белка IRS-1 и GSK3α

LBP процедуры улучшение поражения печени

Печеночная H&E окрашивание результаты показали, что 12-недельный администрации высоким содержанием жиров, причиненного типичные Нэш патологических фенотипов печени крыс, в том числе большое количество липидных капель, накопление, инфильтрация воспалительных клеток и некроз гепатоцитов (Рис. 2A). Все моменты времени в LBP лечения (с недели 1 по неделю 12) значительно улучшилась, гистопатология печени после 12 недель, и выставлены сотовой архитектуры, сопоставимый с тем контролем. Интересно, что лечебные LBP лечения от недели 9 на 12 неделе также значительно улучшены тяжести отложение липидов и снижение воспалительных очагов и клеточного некроза в печени. Не было никакой статистической разницы между NAS оценка двух групп LBP процедуры (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12week; Рис. 2C). Сириус красное окрашивание установлено, что образование коллагена в печени Нэш крыс было значительно больше, чем у контрольных крыс. Как лечение групп LBP эффективно снижается образование коллагена, приводя к затуханию фиброз печени (Рисунки 2B и 2D). Последовательно, Нэш крыс выставлены высоким уровнем АЛТ в сыворотке крови на уровне, который был значительно сокращен обеих групп LBP лечения (Рис. 2E). Для АСТ уровне, не было никаких существенных различий среди всех групп крыс (Рис. 2F).

LBP процедуры смягчили фиброз печени

Дальнейшее изучение молекулярных механизмов, лежащих в основе снижения печеночной фиброз LBP, экспрессивные изменения TGF-SMAD путь был, во-первых, оценить. Белка выражение и TGF-β1 и α-SMA был регулируются индукции Нэш (Рис. 3A и 3B). Вестерн-блот-анализа также показали, что фосфорилирование уровень как SMAD2 и SMAD4, был увеличен в NASH group (На рис. 3В). Процедуры с LBP, либо с NASH-LBP 12 недель или терапевтически (NASH-LBP 9-12 недель), значительно снижается уровень фосфорилированной этих белков, не влияя на их базальных уровней. Кроме того, поскольку формирование фиброз печени тесно связана с активацией звездчатых клеток печени (HSCs), мы затем количественно число активированных ГСК в каждой группе, окрашивание synaptophysin, роман маркер для активации ГСК в печени²⁴. Количество synaptophysin-положительных в NASH группе была значительно выше, чем в других пяти групп, преимущественно вокруг centrolobular вен местах (Рисунок 3D). Обе группы LBP лечения (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12 недель) снижение количества активированных ГСК сопоставимый уровень контроля (Рис. 3E). LBP не показали очевидное влияние на фиброзные изменения здоровых крыс, за исключением небольшого снижения α-SMA уровнем протеина (Рисунок 3Б).

Печеночная накопление липидов и оксидативного стресса ослабляется LBP

Для исследования базовых механизмов для ослабленной печени липидов, накопление в обеих группах LBP лечения (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12 недель), экспрессивные изменения lipogenic генов (SREBP-1c и PPARγ2) и липолитический генов (ATGL и адипонектина) были измерены. Индукция Нэш, значительно возросли печеночной экспрессии мРНК SREBP-1c и PPARγ2, в то время как снижение экспрессии мРНК ATGL и адипонектина, ведущих чистое увеличение в сыворотке FFA уровне (Фигуры 4A-4E). В соответствии с ослабленной жировой гепатоз в печени, влияние Нэш по липидного обмена генов был упразднен в обеих группах LBP лечения (Фигуры 4A-4D). Таким образом, уровень в сыворотке крови СЖК была регламентирована до здоровой крысы уровне (Рис. 4E). LBP процедуры не влияют на крыс без Нэш развития (Фигуры 4A-4E).

Перекисного окисления липидов, индуцированного окислительного стресса являются общими последствиями стеатоза печени и инсулинорезистентность при прогрессировании НАСГ²⁵. Чтобы проверить возможные антиоксидантное свойство LBP, мРНК уровень эндогенных антиоксидантных ферментов, кот и GPx были оценены во-первых. В нашом крыс, печеночной уровень этих ферментов была значительно вниз регулируется, показывать нарушениями обороны против печеночная и окислительный стресс (Цифры 4F и 4G). Администрация LBP, либо вместе с или после установления Нэш индукции, эффективно восстановлены уровни обоих антиоксидантных ферментов. Затем мы измеряли содержание продуктов перекисного окисления липидов (печени содержание мда) и оксида азота пути (печеночная nitrotyrosine образование) во всех группах крыс. Нэш крыс показали повышенное содержание обоих мда и nitrotyrosine, свидетельствуя о повышенном состояние печени, перекисного окисления липидов и окислительного стресса. Обе группы LBP лечения значительно уменьшены или даже отменены такие высоты маркеров окислительного стресса (Цифры 4H 4I и).

Процедуры с LBP ослабленной печени, воспаления и апоптоза через NF-κB

Основные патологические расхождение между стеатоза и НАСГ является возникновение воспаления печени. Для решения противовоспалительное действие LBP, мы выбрали три про-маркеров воспаления (ФНО-α, ил-1β и ЦОГ-2) и один хемокиновых маркер (MCP-1) во всех группах крыс для ИФА. Как и следовало ожидать, выражения этих белков были существенно повышены по НЭШУ индукции, которые были либо отменены, либо значительно ослаблены посредством совместного лечения или задержки обращения с LBP (Фигуры 5А-5D). Последовательно, печеночной уровень расщепляется каспазой-3, прямой маркер апоптоза, был увеличен в NASH крыс, указывая на возникновение печеночной апоптоза. Администраций LBP эффективно снизить его уровень (Рис. 5G). Для дальнейшего изучения механизма, мы протестировали экспрессивные изменения внутреннего пути апоптоза. Мы обнаружили, что при прогрессировании НАСГ увеличился уровень белка цитохрома c и уровня мРНК про-молекулы апоптоза Bax, а меньшая в мРНК уровень анти-апоптотических молекулы Bcl-2. Обе группы LBP лечения показали значительно сторно таких последствий (Цифры 5G-5I). С фактором транскрипции NF-κB является основным регулятором как воспалительных, так и апоптотической реакции, затем мы измерили активность его субъединицы p65 в ядерный белок. Активность Р65 Нэш в группе был достоверно выше, чем контрольной группы (Рис. 5F), с указанием активированного состояния NF-κB. Это сопровождалось низким уровнем IκBα, цитозольной ингибитор NF-κB (Рис. 5E). Добавление LBP заметно снижается NF-κB деятельности и восстановил уровень IκBα.

LBP процедуры усиленной аутофагии и регулируемая MAPK пути

Поскольку аутофагии является выгодным для задержки прогрессирования НАСГ⁷мы измеряли несколько ключевых autophagic маркеры у всех крыс. Показано, что Нэш индукции в печени крыс до-регулируемой экспрессии autophagic маркеры, в том числе и Atg5 LC3-II, с вниз-регулирование autophagic негативных регуляторов, в том числе фосфорилированных mTOR и p62. Влияние NASH на beclin-1 выражение не было столь очевидным (Рис. 5J). В обеих группах LBP лечения (NASH-LBP 12 недель и Нэш-LBP 9-12 недель), клеточной аутофагии было дальше потенцируется, когда сравниваются их выражения в NASH group (Рис. 5J). Автомобиль-LBP процедуры не, конечно, влияет на autophagic маркеры в здоровых крыс.

Чтобы далее исследовать лечебные свойства LBP, мы измерили три ключевых члена (p38 MAPK, JNK и ERK1/2) MAPK семьи. В NASH group, фосфорилирование уровни как p38 MAPK и JNK были повышены, но затем снизилась до уровня контроля со стороны администрации LBP (Рис. 5к). Фосфорилирование ERK1/2, напротив, вниз-регулируется Нэш индукции. Обе группы LBP лечения наблюдалось дальнейшее снижение ее фосфорилирования на уровне, не влияя на его общий уровень (Рис. 5к).

L-арабинозы и β-каротин частично учтены для печени лечебные эффекты LBP

Для демонстрации активного мономера (- ов) счета (- ов) для печени лечебные свойства LBP против Нэша развития, мы применили к in vitro клеточный жировой гепатоз модели с использованием натрия пальмитат (SP) в качестве индуктора в крысиных гепатоцитов клеток линии BRL-3A²⁶. После 24-часовой инкубации было установлено, что SP очевидно, вызвано накоплением жира, снижение жизнеспособности клеток в зависимости от дозы образом (Доп. Рис. 3.). Учитывая баланс между очевидным и накопление жира приемлемым жизнеспособность клеток, мы выбрали 0,35 мм SP как оптимальная доза в следующих in vitro исследования. Как показано в Рис. 6Б применение SP значительно снижается жизнеспособность клеток от ~100% ~72%. Совместное обращение с LBP восстановили жизнеспособность клеток, сравнимого с уровнем управления (~95%). Хотя и не столь мощный, как LBP, лечение l-арабинозы или β-каротин также значительно восстановленные клетки статус ~84% или ~85%, соответственно. Кроме того, инкубация с SP также причиной накопления жира в культивируемых BRL-3A клетки, в которых было значительно ослабляется совместного лечения с LBP, либо с l-арабинозы или β-каротин (Фигуры 6а и 6В). Эти процедуры сами по себе не влияют на нормальные клетки (Фигуры 6а-6с).

Для дальнейшего описания полезных ролей l-арабинозы и β-каротин, мы оценивали, инсулина и глюкозы путей метаболизма клетки. Экспозиция BRL-3A клеток SP усиленной глюконеогенеза, который был уменьшен на LBP-или β-каротин лечения (Рис. 6D). Результаты вестерн-блот резистина и фосфорилированных IRS-1 также подтвердил, что SP инкубации существенно индуцирует up-регуляции резистина и обесценение IRS-1 сигнализации. Добавление LBP, l-арабинозы или β-каротин частично counter-действуют эти эффекты. Уровень общего белка IRS-1 не влияют на эти процедуры (Рис. 6E). Кроме того, SP инкубации вызвал повышенный уровень GSK3α фосфорилирования, который был частично уменьшен co-лечение LBP-или β-каротина, не влияя на его общий уровень белка (Рис. 6E). Эти данные показали, что SP инкубации индуцированной нарушениями инсулина и метаболизм глюкозы в BRL-3A клеток. LBP, l-арабинозы и β-каротин, частично компенсированы такие нарушения.

Аналогичные результаты от животной модели, инкубации с SP значительно снижается экспрессия CAT и повышение уровня ФНО-α и клеточного апоптоза. Изменения клеточных каспаз-3/7 деятельности в дальнейшем подтвердили эти выводы (Фигуры 7а-7D). LBP, l-арабинозы или β-каротин лечения либо отменены, либо значительно противодействует эффектам SP, хотя в большинстве случаев, LBP, показали лучшие alleviative эффектов, чем у других двух мономеров (Фигуры 7а-7D).