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Facultad de Ciencias Químicas/ Centro de Investigación y Estudios de Posgrado


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AISLAMIENTO DE COMPUESTOS BIOACTIVOS DE Lippia Graveolens

Mendoza Días S. y Mora Mora M.E.

Facultad de Ciencias Químicas/ Centro de Investigación y Estudios de Posgrado


Universidad Autónoma de Querétaro

RESUMEN




Un extracto butanólico del orégano (lippia graveolens) proveniente de Puebla se analizó por medio de cromatoplacas, con la finalidad de saber si se podían separar los compuestos de dicho extracto. Cabe mencionar que el extracto ya ha sido objeto de estudio y se demostró que este posee propiedades antioxidantes y antimicrobianas, de ahí la intención de tratar de separar los compuestos responsables de estas propiedades.


Mediante los análisis practicados al extracto en cromatoplacas se determinó un sistema de disolventes en el cual sí podía haber separación de compuestos, por lo que se procedió a usar el cromatógrafo de líquidos para así obtener compuestos puros.

En el cromatógrafo de líquidos a su vez se probaron distintos sistemas de disolventes para encontrar el más apropiado para la separación, esto se hizo en columnas analíticas. Una vez determinadas las condiciones ideales de separación y probado la obtención de compuestos puros, se procedió a utilizar una columna preparativa para obtener la mayor cantidad del compuesto puro.

Los cromatogramas muestran el aislamiento de compuestos puros (dos), por lo que se cumplió con el objetivo.


INTRODUCCIÓN

Orégano es el nombre común para más de sesenta especies de plantas con aroma y sabor característicos. La mayoría pertenece a las familias Lamiaceae, género Origanum y Verbenaceae género Lippia. El orégano europeo corresponde a Origanum sp. y el mexicano a Lippia sp. Dentro de los oréganos comercialmente más conocidos se encuentran el O. vulgare (orégano griego), O. Onites (orégano turco) L. graveolens y L.berlandieri (orégano mexicano) (Kintzios, 2002).



Lippia graveolens es la especie de orégano más comercializada en México, desde la antigüedad Lippia graveolens se ha utilizado como condimento y hierba curativa y sigue dicho patrón en la actualidad.

En cuanto a estudios taxonómicos sobre el orégano, los trabajos que se han llevado a cabo han sido en su mayoría sobre el recurso silvestre, casi todos relacionados con aspectos de inventario, rendimiento de hoja seca, así como modelos para cuantificar y predecir la producción (Vázquez, 1991)

Se ha determinado que los flavonoides (compuestos fenólicos) son los compuestos que más abundan en Lippia graveolens (Martínez, 2004). Un punto de interés en los compuestos fenólicos es su propiedad de evitar o retardar la oxidación lipídica (unión del oxígeno a los lípidos formando radicales libres que provocan alteraciones químicas). La oxidación de lípidos puede jugar un papel importante in vivo ya que interviene en enfermedades del corazón, arteriosclerosis, cáncer y en el proceso de envejecimiento (Jadhav y col., 1996).

Considerando que en los últimos años el orégano europeo ha desplazado al orégano mexicano en el mercado internacional, un estudio sistemático y multidisciplinario de Lippia graveolens podría conferirle un valor agregado, además de abrir la posibilidad de comercializar no sólo las hojas o el aceite esencial sino también productos derivados de los extractos polares.




DESARROLLO EXPERIMENTAL

Cromatografía en capa fina

Con capilares se tomó una pequeña muestra del extracto de Lippia graveolens y se aplicó en la cromatoplaca. La cromatoplaca se colocó dentro de una cámara de vidrio a la cual se le adicionaron previamente una mezcla de solventes dependiendo de las características polares de la muestra (el solvente no debía tocar los puntos de aplicación para evitar disolución de la muestra), posteriormente la placa se eluyó, se retiro y se secó. Después se reveló con luz ultravioleta y sulfato cérico (al revelar con sulfato cérico se requiere calentamiento de la cromatoplaca en una parrilla).

Purificación de los principios activos

La separación de los constituyentes individuales de las fracciones activas se realizará utilizando cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC). El primer paso será un ensayo con columnas analíticas y una vez encontradas las condiciones ideales se utilizarán columnas preparativas para aislar los compuestos obtenidos.

La pureza de los compuestos se verificará mediante cromatografía en capa fina.




DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En análisis cromatográfico se observan tres elementos, el primero la fracción butanólica del extracto de orégano (F4), donde se ve la existencia de dos compuestos dentro de esa fracción, también se ve el pico nueve (P9), una sola “mancha”, lo que indica un compuesto puro, y por último, el pico diez (P10) el otro compuesto puro que se logró obtener (figura 1).



Figura 1

El cromatograma (figura 2) muestra claramente la separación de dos picos(los dos más grandes), de los cuales el de mayor longitud (pico 9) tuvo un tiempo de retención de 22.3 minutos, mientras que el pico 10 tuvo un tiempo de retención de 23.7 minutos, el hecho de que se distingan dos picos bien definidos indica que se lograron separar dos compuestos puros, cada uno se recolectó en un matraz erlenmeyer distinto.




Figura 2



CONCLUSIONES
A través de varios ensayos por intentar separar uno o más compuestos puros del extracto butanólico de Lippia graveolens (orégano), se lograron obtener dos, dicho resultado se verificó con dos técnicas apropiadas en la distinción de compuestos puros de impuros, las cuales fueron cromatografía en capa fina y cromatografía de líquidos, por lo que la veracidad en la obtención de dos compuestos puros se respalda en los análisis de las dos técnicas cromatográficas.

Con el aislamiento de compuestos bioactivos se brinda la oportunidad para que sea identificada la estructura de estos, el hecho de conocer su estructura permite compararla con la de compuestos ya conocidos que poseen propiedades antioxidantes y antimicrobianas. Una vez realizados dichos ensayos y obtenido resultados positivos se tendrán dos puntos importantes: el primero la obtención de dos estructuras (con propiedades antioxidantes y antimicrobianas) que permitan compararlas con las ya conocidas y en caso de ser distintas se abrirá un nuevo punto de investigación, y el segundo será conferirle un valor agregado al orégano, con la finalidad de lograr un mayor consumo y por lo tanto una mayor comercialización.


BIBLIOGRAFÍA
Jadhav, S.; Nimbalkar S.S.; Kulkarni A.D.; Madhavi D.L.. In Food Antioxidants. 1a edición. Ed. Dekker. New York: 5-10. 1996
Kintzios S.E.. Profile of the multifaceted prince of the herbs. 1a edición Ed. Spiridon. USA: 2-8. 2002
Martinez Rocha, A.. Determinación de compuestos fenólicos y actividad antioxidante de Lippia graveolens (verbenaceae) procedentes de los estados de Querétaro, Puebla y Guanajuato. Universidad Autónoma de Querétaro. Tesis para obtener el título de Licenciado en Biología. 2004
Vázquez, Cota J.. Propagación vegetativa de orégano por medio de enraizamiento de estacas. Estado actual del conocimiento sobre el Orégano en México.Documento Presentado en la Primera Reunión Nacional sobre Orégano. INIFAP-CIFAP-B.C.S. Academia Nacional de Ciencias Forestales. Ed. Meléndez. Bermejillo, Dgo.,.. México: 41-42.1991


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